食品微生物檢驗(yàn)細(xì)菌的革蘭氏染色實(shí)訓(xùn)

1. 實(shí)驗(yàn)器材

普通光學(xué)顯微鏡、載玻片、接種環(huán)、吸水紙、鑷子、酒精燈等。

2. 實(shí)驗(yàn)試劑

蒸餾水、生理鹽水、草酸銨結(jié)晶紫溶液、革蘭氏碘液、95%乙醇、沙黃染液。

3. 實(shí)驗(yàn)材料

枯草芽孢桿菌斜面、金黃色葡萄球菌斜面、大腸桿菌斜面。

4. 操作程序

涂片→干燥→固定→初染→水洗→媒染→水洗→95%乙醇脫色20～30s→水洗

→番紅復(fù)染1-2min→水洗→干燥→鏡檢觀察。

圖1-1 革蘭氏染色過(guò)程簡(jiǎn)略示意圖

1. 方法與步驟

（1）涂片

取一塊載玻片，滴一小滴蒸餾水于玻片中央，用接種環(huán)以無(wú)菌操作分別平板中挑取少量可疑菌落于水滴中，混勻并涂成薄膜。

（2）干燥

室溫自然干燥。

（3）固定

固定時(shí)通過(guò)火焰2～3次即可。此過(guò)程稱(chēng)熱固定，其目的是使細(xì)胞質(zhì)凝固，

以固定細(xì)胞形態(tài)，并使之牢固附著在載玻片上。

（4）初染

加草酸銨結(jié)晶紫一滴，約1～2min，水洗。

（5）媒染

滴加碘液沖去殘水，并覆蓋約1min，水洗。

（6）脫色

將載玻片上面的水甩凈，并襯以白背景，用95％酒精滴洗至流出酒精剛剛不

出現(xiàn)藍(lán)色時(shí)為止，約20～30s，立即用水沖凈酒精。

（7）復(fù)染

用番紅液染1～2min，水洗。

（8）鏡檢

干燥后，置油鏡下觀察。革蘭氏陰性菌呈紅色，革蘭氏陽(yáng)性菌呈紫色。

2. 結(jié)果與報(bào)告

根據(jù)觀察結(jié)果繪出枯草芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌、大腸桿菌等的形態(tài)圖，注明放大倍數(shù)、及觀察到的顏色。

3. 注意事項(xiàng)

（1）載玻片要潔凈無(wú)油跡；滴蒸餾水和取菌不宜過(guò)多；涂片時(shí)生理鹽水不宜過(guò)多；涂片必須薄而且均勻。

（2）熱固定溫度不易過(guò)高，以載玻片背面不燙手為宜，否則會(huì)改變甚至破壞細(xì)胞形態(tài)。

（3）革蘭氏染色成敗的關(guān)鍵是脫色時(shí)間，如脫色過(guò)度，革蘭氏陽(yáng)性菌也可被脫色而被誤認(rèn)為革蘭氏陰性菌；如脫色時(shí)間過(guò)短，革蘭氏陰性菌也會(huì)被誤認(rèn)為是革蘭氏陽(yáng)性菌。

（4）鏡檢時(shí)，以分散開(kāi)的細(xì)菌的革蘭氏染色反應(yīng)為準(zhǔn)，過(guò)于密集的細(xì)菌，常常呈假陽(yáng)性。

（5）染色后的微生物標(biāo)本是死的，在染色過(guò)程中微生物紫形態(tài)與結(jié)構(gòu)均會(huì)發(fā)生一些變化，不能完全代表其生活細(xì)胞的真實(shí)情況，染色觀察時(shí)需要注意。